Choix et préparation des milieux de culture (MAJ 07/03/2020)

 

Avant de préparer votre milieu, il faudra déjà déterminer celui dont vous aurez besoin suivant vos cultures. Vous trouverez ci-dessous un récapitulatif théorique vous permettant de choisir :

Orchidées Epithytes

Genre
Germination
Repiquage
Ascocenda K400, 1/2 p668, p723 p668
Brassia K400, p723 K400 + poudre de coco
Cattleya K400 + poudre de coco, p668, p723, KOFF + K400 + poudre de coco,  1/2 p668, KOFF MEDIA6, KOFF +
Cyrtopodium p723 723, KOFF MEDIA6
Dendrobium K400 + poudre de coco, M579, KOFF + K400 + poudre de coco, M579, KOFF +
Dendrophylax p723 p723, KOFF MEDIA6, KOFF +
Encyclia p723, KOFF MEDIA6 KOFF MEDIA6
Epidendrum K400 + poudre de coco, 1/2 p668, p723, M579 K400 + poudre de coco, p668, KOFF MEDIA6
Gongora K400 + poudre de coco, p723 K400 + poudre de coco, KOFF MEDIA6
Maxillaria
p723 p748
Oncidium
1/2 p668, p723 1/2 p688, p723, KOFF MEDIA6
Odontoglossum
K400 + poudre de coco, p723 K400
Phalaenopsis
KOFF MEDIA1, p668, KOFF +, p723 KOFF MEDIA1, p668, KOFF MEDIA6, KOFF +
Pleurothallis
p668, p723 KOFF MEDIA6
Prosthechea
p723 p723, KOFF MEDIA6
Schomburgkia
p723 p723, KOFF MEDIA6
Vanda
K400, P723, M579 p723, KOFF MEDIA6, M579
Vanille
K400 + poudre de coco K400 + poudre de coco, KOFF +

 

 Orchidées terrestres

Genre
Germination
Repiquage
Aplectrum
K400 K400 + poudre de banane
Arethusa
K400 + P723  K400 + poudre de banane, KOFF MEDIA6
Bletia
K400, P723,B141 KOFF MEDIA6
Bletilla
P668 1/2, P723 P668, KOFF MEDIA6
Calopogon
K400, P723 P723, KOFF MEDIA6
Calypso
F522,B141, B142 F522
Coeloglossum
K400 K400 + poudre de banane, KOFF MEDIA6
Cymbidium
M579 + 2g peptone (P775) M579
Cypripedium
B141 + BA, F522, K400 1/2 + poudre de coco,M534, B142 B141 + BA, F522, K400 1/2 + poudre de coco, P668 1/2
Dactylorhiza
F522 F522, KOFF MEDIA6
Epipactis
B141 + BA, B142 B141 + BA, P668
Eulophia
P723 KOFF MEDIA6
Goodyera
P668 1/2, P723,M534 KOFF MEDIA6
Gymnadenia
F522, P668 1/2,M534 F522, KOFF MEDIA6,M534
Limodorum
B141 + BA, B142 B141 + BA
Liparis
K400 K400 + poudre de banane, KOFF MEDIA6
Oeceoclades
P668 1/2, P723 P723
Orchis M534,F522, P668 1/2 M534,F522
Ophrys
M534, P668 1/2 M534
Paphiopedilum
P668 1/2 P668
Phragmipedium
P668 1/2 P668
Platanthera
K400, F522, M534, P668 1/2, P723 F522, M534, P723, KOFF MEDIA6
Pogonia
K400 K400
Habenaria
M534 + P723 M534 + P723
Sacoila
K400 + M534
Spathoglottis
P723 P668, P723, KOFF MEDIA6
Spiranthes
K400, M534, P723 M534, KOFF MEDIA6
Thelymitra
P723 P748, B142
Tipularia
K400 K400 + poudre de banane
Zeuxine
P723 P723 + KOFF MEDIA6

Certains nécessiteront l'ajout d'agar agar (7g pour 1 litre) à vérifier dans la composition du produit.

Une fois  votre milieu de culture sélectionné, passons à la préparation  de celui-ci.

Retrouvez l'intégralité des produits sur notre site!

Préparation du milieu de culture

1. Préparation du milieu :

On prépare généralement le milieu de culture une semaine à l’avance, afin de vérifier que les contenants n’ont pas été contaminés lors de leur préparation. La préparation est identique, quel que soit le milieu choisi.
C’est un peu comme une recette de cuisine : 
a) Dans une grande casserole, versez 1L d’eau distillée, d’eau déminéralisée ou d’eau osmosée. Faire chauffer jusqu’à ce que l’eau bouille. Baissez alors le feu, pour faire cesser l’ébullition mais garder l’eau bien chaude (frémissante)
b) Attention : Si le milieu contient déjà de l’agar, passer directement à l’étape c.
Verser l’agar dans la casserole et agitez au fouet régulièrement jusqu’à ce que le mélange redevienne limpide (10 minutes environ). Il faut compter une dose de 7 grammes d’agar pour 1L de milieu de culture.
c) Versez précautionneusement le sachet de media dans la casserole, car la poudre est très volatile et pourrait se répandre facilement en cas de geste inadapté.
d) Laisser chauffer sans faire bouillir, en fouettant régulièrement durant 10 à 15 minutes au moins.
e) Sortez du feu et versez le milieu dans votre tuperware, environ 1cm d’épaisseur par contenant (avec une seringue, c’est plus facile)
f) Percez les couvercles d'un trou d'1mm de diamètre et placcez un morceau de bande micropore. Mettez le couvercle une fois redroidit complètement.

  

     etape 4.jpg

2. Stérilisation des tuperwares :

a) Les tuperwares sont placés dans le panier vapeur de la cocotte-minute, dans laquelle on a versé préalablement une hauteur d’eau d’environ 1 cm. 
b) Fermez la cocotte-minute et mettez-là sur feu vif
c) Lorsque la cocotte se met siffler, baissez le feu de façon à ce que la soupape chuchote gentiment et comptez alors 24 minutes de « cuisson »
d) Les 20 minutes écoulées, coupez le feu, (ou sortir la cocotte de la plaque si votre cuisinière est électrique) et laissez retomber complètement la pression et refroidir complètement la cocotte avant de l’ouvrir
e) Sortez-les de la cocotte minute. En refroidissant, le milieu gélosé se solidifie. Filmez-les avec le cellophane de façon à ne pas laisser l’air rentrer. Ils peuvent être déformés en sortant de la cocotte minute mais ils reprendront leur forme initiale après refroidissement.
Au bout de deux heures, stockez les vos contenants à température ambiante, à l’abri des chocs (buffet, étagère, etc.) On peut également les conserver au réfrigérateur si on ne souhaite pas les utiliser avant plusieurs semaines.
f) Au bout de trois ou quatre jours, vérifiez-les pour d’éventuelles contaminations. Ecartez tous ceux qui vous sembleraient douteux (dépôt blanchâtre, mousse, etc.…)

Exemple de contamination

contamination

Stérilisation des Microbox

 

La stérilisation de ces boîtes se fera avec une mèche placée dans un coin et couvercle fermé aux 3 autres coins. Placez les boîtes et lancer le feu de façon à ce que la pression monte lentement.

Après 25 minutes de cuisson, laissez la pression redescendre et ouvez votre cocotte.

Enlevez les bandelette et fermez le dernier coin.