Désinfection et semis des graines

 

1-      Préparation du désinfectant

 

1)     L’Hypochlorite de Calcium est un produit instable, corrosif et chloré qui peut provoquer de graves brulures. Donc à manipuler avec précaution. A cause de son instabilité, on le prépare juste avant de l’utiliser.

2)     Pesez 5 grammes d’Hypochlorite de calcium
Dissoudre l’Hypochlorite avec 100ml d’eau. Le but est de créer une solution sur saturée, il est donc normal qu’un résidu non dissous persiste au fond du récipient. Agitez régulièrement le mélange durant une dizaine de minutes puis laissez décanter pendant encore une dizaine de minutes.
Versez alors le liquide dans l’entonnoir dans lequel vous aurez mis un filtre à café, en essayant de ne pas entraîner trop de dépôt dedans.

3)     Cette solution d’hypochlorite est utilisable durant quelques heures à température ambiante. Stockée au frigidaire, dans un récipient bouché, à l’abri de l’air et de la lumière, elle se conserve plusieurs jours.

 

2-    Stérilisation des graines

 

A la seringue (recommandé pour les débutants)

1)     Placer une petite quantité de graines dans votre seringue et vider l’excédant d’air

2)     Aspirer votre solution d’Hypochlorite de Calcium à l’aide de votre seringue puis secouer là pendant 5mn (temps variable voir descriptif en bas du protocole)

3)     Une fois le temps écoulé, placer un coton sur l’embout de votre seringue et vider là doucement, les graines resteront au bout de la seringue, une légère aspiration les fera reculer.

4)     Aspirer de l’eau stérile avec celle-ci afin de rincer vos graines, puis avec un autre coton, répéter l’opération précédente de vidage. Renouvelez si besoin.

5)     Une fois votre opération de rinçage effectuée, aspirer 10ml d’eau stérile avec votre seringue puis placer le coton imbiber d’hypochlorite de calcium au bout de la seringue afin d’éviter toute contamination.

 

Au tube en verre

a) Placer une quantité de graines équivalente à la taille de deux grains de riz dans un tube à essai.
b) Remplir le tube à moitié, avec la solution d’hypochlorite de calcium préparée précédent.
c) Tenir le tube entre le pouce et l’index, de façon à boucher l’extrémité du tube avec un doigt. Démarrer le minuteur pour 5 minutes en agitant régulièrement le tube.
d) Au bout de 4 minutes, maintenez le tube bouché en position verticale, ouverture vers le bas. Durant la minute restante, les graines vont remonter petit à petit à la surface du liquide.
e) Quand les 5 minutes sont écoulées, retirer brusquement votre doigt de l’ouverture : le liquide va s’écouler et les graines resteront collées le long de la paroi du tube. Mettez un bout de coton et placez le tube dans la glove-box

 

3- Désinfection de la glove box

 

Matériel nécessaire :


- une glove box

- les gants en latex (facultatif)

- Une solution d'eau de javel a 2,5%

- Les feuilles d'essuie tout

- un pulvérisateur

 

Etape 1 :

versez dans un pulvérisateur votre solution d'eau de Javel a 2,5% ainsi que quelques gouttes de liquide vaisselle. fermez le, secouez et laissez reposer 2 à 3mn.

Etape 2 :

Pulvérisez avec partimonie un peu de votre solution Javelisée dans votre glove box. Disposez quelques feuilles d'essuie tout au fond de votre Glove box afin que les objets ne glissent pas durant vos manipulations au sein de la boîte.

Etape 3 :

Réunissez tous les éléments dont vous aurez besoin pour vos manipulations, aspergez-les avec votre solution Javelisser en instant bien sur les fentes/recoins puis disposez-les dans votre glove box.

Etape 4 : 
Une fois tous les objets utiles placés dans votre glove box, ré-aspergez-les de nouveau en instant bien sur l'ensemble de votre boite, puis placez le couvercle et attendez 30 à 40 minutes sans l'ouvrir

 

Vous pourrez passer vos mains dans les gants déjà en place, en mettant des gants latex en plus si besoin et travailler dans un endroit stérile. Pensez toujours à faire des gestes lents et précis.

 

 

4-    Semis - Après stérilisation de la glove-box

 

1)     Prenez le contenant qui accueillera vos graines préalablement stérilisées ainsi que votre seringue contenant vos graines.

2)     Ouvrez le contenant, ôtez le coton au bout de la seringue et d’une pression rapide, expulser le contenu de la seringue sur votre milieu de culture puis refermer votre contenant.

3)     Si vous avez opté pour le semis au tube en verre, récupérez les graines à l'aide d'une spatule et étalez-les sur  la surface gélosée.

4)     Une fois votre semis réalisé, fermez bien votre contenant. Ouvrez la glove-box, sortez le contenant et filmez-le à l'aide de cellophane. Placez-le dans votre chambre de culture.

N'oubliez-pas de bien identifier votre semis à l'aide d'étiquettes ou de marqueur.

 

Temps de stérilisation :

Épiphytes ou terrestres : Hypochlorite de calcium pendant 5mn

Vandae ou Paphiopedilum : Hypochlorite de calcium pendant 6 mn

Phalaenopsis : Eau oxygénée modifiée à 10 Volumes pendant 6mn

 

Le semis "en vert"

Si vous savez a quel moment détacher votre capsule, vous avez la possibilité d'effectuer cette technique. La capsule doit être fermée donc l'intérieur sera encore stérile ce qui augmentera considérablement les chances de germinations.

 

1- Détachez la capsule de la plante

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2- Coupez les feuilles

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3- Mettez votre gousse dans un récipient fermé avec du désinfectant ( Hypochlorite à 10% par exemple + 1 goute de liquide vaisselle) puis laissez là 10mn minimum en remuant de temps en temps.

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4- Vous pouvez par la suite placer votre récipent dans votre zone de travail stérile (glove box) puis avec un scalpel, l'ouvrir de tout son long et extraire les graines pour les semer directement.

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Après quelques semaines, vous devriez avoir les premiers protocormes. Certaines graines peuvent mettre plusieurs mois avant de germer. Ne désespérez pas!

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Une fois bien évolués, il faudra passer au repiquage.